32400梅里埃肠杆菌G-鉴定试剂（ID 32 E）说明书

32400梅里埃肠杆菌G-鉴定试剂（ID 32 E）说明书

32400梅里埃肠杆菌G-鉴定试剂（ID 32 E）说明书

【产品名称】

通用名称:肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(比色法)

英文名称:API 20 E

【包装规格】

25 测试/盒、100 测试/盒。

【预期用途】

该产品用于肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定。

该产品用于可导致腹泻、血流感染、尿路感染等的肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定,临床常

见样本来源有粪便、直肠拭子、尿、血等。

【检验原理】

API 20 E 试条由 20 个含干燥底物的微量小管组成。将菌悬液接种到管内,使小管内底物溶解。孵育过

程中,所产生的代谢产物通过自发反应或加入附加试剂后而变色。鉴定结果可根据说明书的判读表进行

读出,也可参照生化谱检索手册或鉴定软件,得到鉴定结果。

【样本要求】

API 20 E 不能直接用于临床或其他标本(例如血样,尿样和粪样、直肠拭子等等)。需要进行鉴定的微

生物必须首先根据标准微生物处理技术于适合肠杆菌和/或非苛养革兰阴性杆菌生长的培养基上分离培

养。

【检验方法】

氧化酶试验:

必须按照制造商的使用说明进行氧化酶试验。由于它是最终图谱的组成部分,请将其结果记录于报告单

上( 十一个试验)。

试条的准备

? 准备一个培养盒(盘和盖子),倒入约 5mL 蒸馏水或软化水【或其它不含添加剂或不含有能产生挥发

性气体(如 Cl2, CO2,等)的化学物质的水】于盘的蜂窝小凹中,造成一个湿室。

? 在盘的长边写上菌株号(不要写在盖上,因为操作过程中很容易将盖子放到其它试条上)

? 从包装中取出试条。

? 将试条置于培养盒中。

注意:API 20 E 只能用于肠道细菌和或非苛养的革兰阴性杆菌。苛养菌由于对营养有特殊要求并且需要

合适的防护措施(例如布鲁氏菌属 Brucella 和法朗西丝菌属 Francisella),这些菌没有包括在 API 20 E 数

据库中。 必须采用其它方法,来排除或确认这些菌的存在。

接种物的准备

? 根据“警告及注意"一栏所列方法打开一安瓿 API 0.85% NaCl 培养基(5mL)或一安瓿 API 悬浮培养(5

mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 盐水或不含添加剂的无菌蒸馏水。

? 用吸管或 PSIpette 从分离平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中。建议使用新鲜培养物(18-24

时)。

? 仔细研匀以达到均一的细菌悬液。

制备好的菌悬液必须立即使用。

注意:大多数弧菌(Vibrio)均嗜盐,如怀疑菌株为弧菌,请使用 0.85% NaCl (5mL)培养基。肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(比色法) 版本号 07584J- zh -2010/05

试条的接种

? 用同一根吸管,将菌悬液加入到试条的小管内。为避免在小管的基底部形成气泡,请将试条轻微向前

倾斜并把吸管或者 PSI 管紧靠小杯边缘加入菌液):

- CIT、VP 和 GEL 小管,菌液需充满的管部和杯部。

- 其它管仅充满管部(不是杯部)。

- 在试验 ADH, LDC, ODC, H2S 和 URE 小杯内加入矿物油以形成厌氧环境。

? 盖上培养盒。于 36℃±2℃孵育 18~24 小时。

【阳性判断值】

请参考本说明书后的“反应鉴定表",表中列出了各种生化反应预期结果范围。

【检验结果的解释】

试条的判读

? 孵育后,根据判读表表判读各反应结果。

? 如果 3 个或 3 个以上测定(GLU 试验+或-)为阳性结果,记录所有自发反应于结果报告单上并观察需

附加试剂的试验的结果:

- TDA 试验:加 1 滴 TDA 试剂。深褐色为阳性反应,记录于报告单上。

- IND 试验:加 1 滴 JAMES 试剂。整个反应管出现粉红色者为阳性,记录于报告单上。

- VP 试验:加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 试剂。至少等待 10 分钟,出现粉红或红色者表明为阳性结果,

记录于报告单上。如浅粉红色在 10 至 12 分钟内出现,判断结果为阴性。

注意:吲哚产生试验必须 进行,因为该反应释放的气体产物会千扰试条的其他试验。在加入附加

试剂后,请小心勿调换培养盒盖。

? 如果加入附加试剂前阳性结果(包括 GLU 试验)的数量少于 3 个:

- 重新培养 24 小时(土 2 小时),且不要加任何试剂。

- 重新进行需要加入附加试剂的试验(如前说明)。

- 为了完成鉴定,可能需要进行补充试验(参考有关鉴定的段落)。

解释

鉴定结果根据数值编码获得。

? 数值编码的确定:

在结果报告单,每 3 个试验为一组,每个阳性试验分别赋予数值 1、2 或 4,在每组中,阳性反应以相

应的数值相加,由此可得到一个 7 位数字的编码。氧化酶反应构成第 21 个试验,如阳性则赋予数值 4。

? 鉴定:

鉴定结果是根据数据库(V4.1)得到。

*根据鉴定检索手册:

- 从检索手册中查找数值编码。

*根据 apiweb TMM鉴定软件:

- 在键盘上输入 7 位数字的数值编码。

在某些情况下,7 位数字的数值编码还不能区分细菌,必须进行以下一些补充试验来进一步的鉴定:

- 硝酸盐还原到亚硝酸盐(NO2)和氮气(N2):各加一滴 NIT 1 和 NIT2 试剂于葡萄糖(GLU 管内,待 2~3

钟后,红色表示阳性结果(NO2)。阴性反应(黄色)可能由于还原至 N2 (有时还有气泡):加 2-3mg 锌

粉到葡萄糖(GLU)管,5 分钟后,如果管保持黄色表示阳性结果(N2),记录于报告单。如果变为橘红,

则是阴性反应:仍留在管内硝酸盐被锌粉还原。该反应对检测革兰阴性、氧化酶阳性的杆菌有用。

注意:出于和吲哚试验同样的原因(参考“试条的判读"中的注意项),硝酸盐还原试验必须 进行。

- 动力(MOB):接种一安瓿 APIM 培养基(参见产品说明书)。肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(比色法) 版本号 07584J- zh -2010/05

- 麦康凯(MacConkey)培养基生长实验(McC):接种一个麦康凯(MacConkey)平板(参见产品说明书)。

- 葡萄糖氧化(0F-0):接种一安瓿 API OF 培养基(参见产品说明书)。

- 葡萄糖发酵(OF-F):接种一安瓿 API OF 培养基(参见产品说明书)。

这些在数值编码本开始部分有所介绍的补充试验,可以组成 9 位数的数值索引。从而可以用鉴定软件

获得鉴定结果。